为什么荧光定量PCR会出现无Ct值现象

荧光定量PCR有时会出现无Ct值现象，其主要原因有：①反应循环数不够：一般FQ-PCR反应循环数在35个左右，可根据实验情况增减循环数，但高于45个循环会增加过多的背景信号；②检测荧光信号的步骤有误；③引物或探针降解：可通过凝胶电泳检测引物或探针的完整性；④引物或探针设计问题：TaqMan探针法检测时，通常要求探针Tm值比引物Tm值高10℃左右，以保证探针退火时首先与目的片段结合，如果探针Tm过低，则可能造成探针未杂交上而产物已延伸的情况；⑤模板量不足：对未知浓度的样品应从系列稀释标本的最高浓度做起；⑥模板降解：避免样品制备中杂质的引入及反复冻融的情况。