酶联免疫吸附试验的过程是怎样的?

酶联免疫吸附实验又称为ELISA，它常常被用来定量地检测特定的蛋白，在临床医学、食品分析、农牧渔业等多领域有广泛的应用。

以某种蛋白X为例，ELISA一般可分为以下几个基本步骤^[1,2]：

1. 针对蛋白X设计一种专门能与其特异性结合的抗体（又称捕获抗体），再使其充分吸附在固相载体（聚苯乙烯微量反应板）上，即包被。一般来说，这一步骤会由专业的厂家提前完成。

 

2. 加入蛋白X使其与抗体特异性结合（目标蛋白被捕获），经过洗涤去除未结合的抗体。

 

3. 加入酶联抗体。这种抗体也能够与蛋白X特异性结合，并且还联结了一种特殊的酶。目前应用较广的有辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AKP）。其作用是在加入底物溶液后，它们能够灵敏地催化底物得到具有颜色的产物。

 

4. 洗涤去除未结合的酶联抗体后，加入含有可以被酶催化显色的底物溶液，待其充分反应后，即生成了有色的产物，肉眼可以看到溶液颜色发生了转变。

 

5. 使用酶标仪（类似分光光度计）检测样本OD值，再通过计算得到蛋白X的含量。

 

以上是ELISA最为常见的双抗夹心法（三明治法）的基本步骤，该方法专一性强，灵敏度高，适用于具有多个抗体结合位点的大分子抗原。此外，ELISA还有直接法、间接法（原理可见下面的示意图）、斑点ELISA、竞争ELISA等[3]。

 

 

关于实验中的具体操作，又包括样品稀释、抗体孵育、显色、OD值检测几个步骤。

 

参考文献：

[1]朱慧莉,黎锡流,许喜林.酶联免疫吸附法及其在食品分析中的应用[J].食品工业科技,2001(02):80-82.

[2]谭立明.ELISA法检测的影响因素及其对策[J].实验与检验医学,2013,31(04):300-305.

[3]周赛赛,罗润波,陈建春,格桑卓玛,索朗斯珠.基于ELISA技术检测流感病毒的研究进展[J].中国家禽,2019,41(17):45-49.