到底准不准?困扰检验人的末梢血检测难题终于有办法了!

发布于 2021-09-20 15:29


作者：张连杰  韩清珍  王琳 深圳迈瑞：丁祖月  
单位：苏州市独墅湖医院


根据CNAS-CL02《医学实验室质量和能力认可准则》[1]的要求，在常规应用前，实验室应对未加修改而使用的已确认的检验程序进行独立验证。

本实验室为确定末梢血血细胞分析检测系统能达到试剂说明书上声明的性能指标，满足临床的检测要求，保证检验质量[2]，在启用迈瑞BC-7500CRP全自动血液细胞分析仪前，对其微量模式检测系统进行性能验证[3]。


案例经过




本次验证选取本院2021年3月1日-3月25日检测完的新鲜EDTA抗凝静脉全血做样本，原装配套高中低三个水平质控品。仪器与试剂耗材选用BC-7500 CRP全自动血细胞分析仪及原装配套试剂、康健KJ1001-1微量采血管、SC-120 全自动推片染色机、离心机、Olympus 双目显微镜、加样枪、塑料吸管等。

PS：以下样本检测如无特殊说明，均采用将样本转移到微量采血管里自动进样检测。


本底计数


将原装DS稀释液作为样本连续进样3次，3次检测结果的最大值应在允许范围内[4]。三次本底计数检测结果均为0，空白检测良好，几乎无本底干扰，验证数据详见表1。

表1. 本底计数验证数据和结果判断


携带污染率


将高值样本混合均匀后连续测定三次，测定值分别为H1、H2、H3，再取低值样本连续测定三次，测定值分别为L1、L2、L3。携带污染率=(L1-L3)/(H3-L3) ×100%，携带污染率应在允许范围内。WBC、PLT高值取自高值临床样本，RBC、HGB高值由样本离心浓缩获得。

RBC携带污染率为0.15%，其余参数均为0，说明仪器冲洗性能良好，标本间几乎无交差污染，验证数据详见表2。

表2. 携带污染率验证数据和结果判断


精密度


取一份在生物参考区间内的新鲜血样本，用微量模式连续重复测定11次，计算后10次结果的均值、标准差和变异系数(CV%)，检测批内精密度。使用迈瑞原装高中低3个浓度水平的质控品，每天进行1次室内质控，连续检测至少20天，剔除失控数据后计算在控数据的变异系数，评价日间精密度。

WBC、PLT批内精密度变异系数分别为1.88%和1.40%，其余参数的CV值均小于1%，批内精密度符合标准，验证数据详见表3。各参数高中低三个水平质控的日间精密度变异系数均小于评价标准，日间精密度良好，验证数据详见表4。

表3. 批内精密度验证数据和结果判断

表4. 日间精密度验证数据和结果判断


实验室内的结果可比性


取20份尽量覆盖每个参数高中低值的新鲜血样本[5]，用微量管自动进样检测。以本实验室通过室间质评的BC-6800Plus检测系统测定的结果为标准，计算偏倚。每个参数的偏倚满足要求的比例应≥80%。

以本实验室通过室间质评的BC-6800Plus检测系统为准，计算BC-7500 CRP血细胞分析仪微量模式检测结果的偏移，偏倚满足要求的比例为≥80%，HCT、MCHC比例为95%，WBC、RBC、 HGB、MCV、MCH、PLT比例为100%，所有参数的偏倚满足要求的比例均≥80%，两台仪器间有良好的可比性，验证数据详见表5。

表5.各检测项目偏移和结果判断


白细胞5分类正确度


取20份散点图无明显异常的新鲜样本，自动进样检测2次，以两位具备资质的人员手工分类结果均值为标准[6, 7]，计算95%置信区间，仪器测量结果均值在此区间内判定为合格，合格率应≥80%。

将仪器法测量结果平均值与95%可信区间比较，单核细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞合格率为95%，中性粒细胞合格率为85%，淋巴细胞合格率为80%，所有参数合格率均≥80%，验证通过。


不同吸样模式间比对


取5份新鲜血样本，用全血模式和微量模式各检测2次，以全血模式为标准，计算两种模式下检测结果均值间的偏倚。每个参数的偏倚满足要求的比例应≥80%。

5份样本不同模式间比对除了WBC合格率为80%外，其余参数合格率均为100%，微量模式和全血模式比对通过，验证数据详见表6。

表6. 不同吸样模式间比对验证数据和结果判断


线性范围


在厂家声称的线性范围内，将高浓度样本用原装稀释液按100%、80%、60%、40%、20%、10%、5%比例进行稀释，使低浓度值接近线性范围下限。各浓度梯度测定3次，计算平均值。将实测值与理论值作线性回归方程，斜率应在1±0.05范围内，相关系数r2≥0.95[8]。WBC、PLT高值取自高值临床样本，RBC、HGB高值由样本离心浓缩获得。

在验证范围内，回归曲线斜率均在1±0.05范围内，相关系数r2均大于0.95。RBC的线性范围为（0.36-7.26）×1012，HGB的线性范围为（11-237）g/L，因低值WBC和PLT有重要临床价值，因此进行了分段验证，高值WBC验证的范围为（13.19-263.84）×109，低值WBC验证的范围为（0.68-13.52）×109，因此（0.68-263.84）×109可作为白细胞的线性范围，同理PLT的线性范围为（3-2651）×109 ，验证数据详见表7。

表7. 线性范围验证数据和结果判断


案例分析




临床检测中，婴幼儿末梢血检测依然面临着许多的困难和挑战：检验前操作复杂；传统的采集管需提前编号，无法正规粘贴条码，仪器不能直接读取信息，信息化断链；检测过程中，血常规和CRP需分开检测，增大了末梢血的需血量；检测结果受操作者手法影响，个体差异大，无法标准化[10]。

因此实现儿童末梢血血常规批量化、自动化、标准化、信息化检测是大势所趋，BC-7500 CRP集末梢血和静脉血检测、高速CRP检测于一体，实现了末梢血检测同静脉血检测相同的检测流程，为临床尤其是儿科提供了全新的血液分析解决方案，进一步推广末梢血检测在临床的应用。

BC-7500 CRP微量模式检测每次分析需血量仅为27.5ul，是全血模式下的1/3。本实验室通过验证发现，其各方面性能并没有随分析血量的减少而下降，依然能保证检验质量，满足临床检测要求[11]。

数据结果显示，三次空白计数均为零，携带污染率也远低于行业标准要求，表明仪器冲洗性能良好[12]，检测过程中可忽略本底干扰和交叉污染。精密度是评价仪器稳定性的指标，能反映系统随机误差[13]，本研究数据结果显示 BC-7500 CRP微量模式检测系统各参数的批内精密度和日间精密度均小于行业标准的要求，仪器稳定性良好。与内部基准仪器BC-6800Plus 比对进行实验室内结果可比性验证时[14]，所有参数的偏倚满足要求的比例均≥80%。

进行白细胞5分类正确度验证时，所有参数的合格率都不为100%，分析原因有两点：一方面，微量模式分析血量少，随机误差大；另一方面，仪器采用激光散射结合荧光染色的流式细胞技术进行细胞分类，相当于一种间接方法，对WBC的分类计数只能作为一种参考方法，不能完全代替人工分类方法[15]。本实验室将BC-6800Plus与BC-7500 CRP微量模式分类结果进行比较，以BC-6800Plus分类结果为准设置95%可信区间，BC-7500 CRP测量结果均落在此区间内，所有参数的合格率都为100%，说明仪器法分类结果具有相当好的一致性和可比性。

线性范围是指在一定测量范围内，测定结果与样本中检测物的量值成比例。本实验中线性范围验证数据显示，WBC、RBC、HGB、PLT 的线性范围分别为（0.68-263.84）×109/L、（0.36-7.26）×1012/L、（11-237）g/L、（3-2651）×109/L，各参数线性范围相对宽裕，能满足末梢血检测要求；全血模式和微量模式比对结果显示，两种模式结果具有可比性。


案例总结




综上所述，迈瑞BC-7500 CRP血细胞分析仪微量模式各项指标验证结果良好，符合厂家声明的要求，检测结果可靠，能满足临床检测需求，是目前市场上一款良好的能胜任末梢血分析的血细胞分析仪。

【参考文献】

[1]中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL02医学实验室质量和能力认可准则(ISO15189:2012,IDT)[S].2013.

[2]丛玉隆，乐家新，袁家颖.实用血细胞分析技术与临床[M].北京：人民军医出版社,2011:14.

[3]陈俊，朱红青，陈如昌，等．末梢血和静脉血Coulter－JT血细胞计数仪检测结果分析［J］．临床检验杂志,2004,17(1):24．

[4]中华人民共和国卫生部.WS/T 406-2012临床血液学检验常规项目分析质量要求[S].北京:中国标准出版社,2012.

[5]王玉霞，李伟，巴杨杨.迈瑞BC-6800血细胞分析仪临床应用性能验证[J].吉林医学，2019,40(2):299-301.

[6]杨竹君. Sysmex xs-800i 全自动血细胞分析仪与血涂片镜检白细胞分类的比较[J].国际检验医学杂志，2015,36(23):3468-3470.

[7]中华人民共和国卫生部.WS/T 246-2005白细胞分类计数参考方法[S].北京:人民卫生出版社,2006.

[8]临床化学设备线性评价指南：WS/T 408—2012[S].北京：中国标准出版社，2012.

[9]吴志成，董晶，李进，等. BC-6800血细胞分析仪精密度和正确度性能验证[J]. 实验与检验医学，2017,35(4):504-507.

[10] 曹科,罗小娟,杨庆斌,吴跃平,李德发.手指末梢血不同采集方式对血细胞分析仪测定结果的影响研究[J].国际检验医学杂志,2012,33(9):1671-8348.

[11] 中国合格评定国家认可委员会.CNAS-CL02-A001 医学实验室质量和能力认可准则在临床血液学检验领域的应用说明[S].北京:中国标准出版社,2012.

[12] 刘丽萍, 李婷, 曹坤等. Sysmex XN-2000血细胞分析仪的性能验证[J]. 中国医疗器械信息, 2021, 第27卷(3):12-14,148. 

[13] 黄芝丽，谢有军，钟嘉宁，等. BC6000PLUS 全自动血液细胞分析仪的性能验证[J].广西医科大学学报，2018,35(5):734-736. 

[14] 唐仕华，杨柠，陈丹，等. XN-9000 全自动血液分析仪性能评价[J].国际检验医学杂志，2016,37(17):2471-2473.

[15] 赵辉，王彦焱. Sysmex xs-1000型全血细胞分析仪的性能评价[J].国际检验医学杂志,2016,37(9):286-1288.


编辑：yeah  审校：小冉


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