干货|国自然基金申报书万能模板鉴赏

    以下是国自然申报书写万能模板

报告正文

1、项目的立项依据

XXX疾病及其研究进展

    XXXX疾病(XXXXXX，XXX英文名称)是XXX系统(消化、呼吸、神经等等)常见的一种疾病类型，多数是由于XXXX出现功能紊乱以及XXXX功能失调等所诱发，主要表现为XXXX(临床症状或者临床特征)，致使XXX组织或者器官发生XXXX等症状，可以引起XXXX、XXXX以及XXXX等严重后果。同时，XXXX(该疾病)也是导致其他类XXXX相关疾病的主要原因之一。目前的研究表明，XXX疾病主要是由于XXXX所引起的(或者说跟XXX有关，也可以说关于该疾病的发病机制还没有研究清楚)，对于该疾病的治疗，目前尚没有有效的治疗方法或者药物(或者目前已有药物有哪些不足，存在哪些问题)。

XXXX分子及其介导的信号通路在XXX疾病中的作用

    已有的研究的发现，XXXXX分子及其所介导的XXX信号通路在XXX疾病发生和发展的过程中发挥着非常关键的作用。(接下来主要介绍该分子及信号通路在该疾病发生过程中的作用，可以通过相关的综述来写)

    XXX分子是一个XXXX家族的蛋白，主要功能是XXX，主要介导XXX信号通路等，研究证明XXX在XXXX过程中有作用。(大概一两百字介绍该分子)

    XXX信号通路是什么，怎么传导，下游激活哪些基因表达，在XXX疾病或者临床问题中是否有过研究。如果有过研究，详细说明以往的研究证明XXXX信号通路是如何参与该疾病的发生过程的。

    因此，提示我们XXXX可能在XXX疾病过程中发挥着重要作用/可能是XXX临床问题产生的关键机制所在等。

XXXX分子可能通过XXX通路进而在XXX疾病过程中发挥作用

    首先介绍自己的研究基础工作

    我们前期的研究发现：XXXX在XX疾病中具有什么作用。(这里可以使用条目列出自己前期的研究成果)

其次根据自己的研究成果提出科学假说

根据我们前期的研究工作，我们认为：XXXX(提出自己的工作假说)。

    我们发现XXX分子在XXX中具有明确的功能，可能是这一临床问题的关键所在，然而其发挥作用的内在机制尚不清晰。所以，我们提出以下假说：XXXXX在某某疾病的过程中，通过作用于XXXX/表达上调/表达下调等等方式，激活XXXX信号通路，调控XXXX细胞功能，最终对某某疾病起到保护或者促进的作用。

    注：这里重点介绍自己前期的工作基础及研究结果，并最后根据自己的研究结果提出一个科学假说。

    概括研究内容及研究价值

    在我们前期研究工作的基础上，本项目拟通过XXXX的方法/方式/手段，明确/阐明/验证XXXX，为进一步理解XXXX以及XXXX疾病的药物治疗(药物开发、靶点选择)提供了理论依据(靶点、候选等)。

    注：该部分主要内容就是概述自己研究的主要内容，最终可能得出的结果，以及研究的意义和价值等。

2、项目的研究内容、研究目标，以及你解决的关键问题。

　　A. 研究内容

    1)在人类组织学水平上验证XXX分子与疾病的相关性

    为了验证XXX是否与XXX疾病具有相关性，我们收集XXX例该疾病的临床样本，并使用qPCR、Western Blot、免疫组化等等方法，分别检测XXX分子在mRNA水平、蛋白质水平的表达情况以及组织中的分布等。根据所收集到的实验结果，分析该分子是否与该疾病存在显著的相关性。

    2)在动物水平上验证XXX对XXX疾病动物模型的保护性作用及可能的作用机制

    为了验证XXX是否能够影响XXX疾病的发生、发展过程，我们使用XXX诱导XXX疾病动物模型，并检测XXX在不同疾病动物中的变大差异。同时给予动物XXX相关的治疗，然后分别收集不同组动物的哪些样本，使用什么方法做哪方面的相关等。

    分离XXX疾病动物相关细胞，检测XXXX的变化是否影响细胞的相关功能，如增殖、迁移、分化等。

    3)在细胞水平上明确XXX在该疾病过程中可能的机制

    为了进一步明确XXXX在XXX疾病过程中的详细机制，我们使用XXX细胞(细胞系或者分离的原代细胞)，给予细胞什么处理或者怎么分组，培养多久后做哪些相关方面的检测。如收集细胞总蛋白，检测蛋白表达;收集细胞总RNA检测基因表达变化;收集细胞做细胞功能检测等。最终通过该部分实验明确XXX是通过什么机制在XXX疾病过程中发挥作用的。

    4)在动物水平上验证XXX作为XXX疾病治疗的可行性

    为了明确XXX分子或者其调控的XXX信号通路是否可以作为XXX疾病药物治疗的靶点，我们使用XXX(可以是蛋白分子或者信号通路的抑制剂等)作为药物给予疾病动物治疗，治疗后收集不同的样本，检测相关的疾病指标，最终明确是否XXXX或者其调控的XXX信号通路可以作为XXX疾病治疗的靶点。

    B.研究目标：

    1)明确XXX是否与XX疾病的发生和发展具有临床上的相关性;

    1)明确XXX是否对XX疾病具有保护性或促进性作用;

    2)确定XXXX调控XXX功能可能的信号通路或关键性的靶点分子;

    3)验证XXX作为XX疾病药物治疗靶点的可行性。

    C.你解决的关键科学问题

    1)明确XXX是否与XX疾病在临床上存在相关性;

    2)成功构建XXX实验检测系统/实验方法等;

    3)明确XXX是如何通过参与XXX信号通路来发挥其对疾病的影响作用的。

3、拟采取的研究方案及可行性分析

    A.研究方案

    1)在人类组织水平上验证XXX与XX疾病是否具有相关性

    临床样本的收集

    主要包括收集的样本数目，收集样本的标准，哪些样本需要排除在外，样本中相关物质或成分的分离、处理以及保存等等

    临床样本的检测

    使用XXX方法(方法一)，检测XXXX;

    使用XXX方法(方法二)，检测XXXX;

    使用XXX方法(方法三)，检测XXXX。

    2)在动物水平上验证XXX对XXX疾病动物模型的保护性作用及可能的作用机制

    动物实验

    使用什么方法构建XX疾病动物模型，动物模型如何构建，如何分组，每组如何处理等。在什么时间做哪些相关处理。如给药处理X天后，使用XXX试剂麻醉动物，分别取XXX、XXX、XXX等组织进行相关检查。

    体外实验

    使用XXX方法(方法一)，检测XXXX;

    使用XXX方法(方法二)，检测XXXX;

    使用XXX方法(方法三)，检测XXXX。

    3)在细胞水平上明确XXX在该疾病过程中可能的机制

    细胞的分离、培养及处理

    使用什么方法(如何操作)，获取什么细胞(如何获取)，该细胞如何培养(培养基、培养条件、细胞密度等)，如何处理(处理剂量、时间)，处理多长时间，如何分组等。处理方式有：过表达、基因抑制、药物处理、相关抑制剂处理、相关激动剂处理等。根据处理不同对细胞进行分组。

    细胞功能检测

    细胞增殖情况检测：MTT法、CCK-8、流式细胞术、CFSE染色等;

    细胞凋亡检测：DNA ledder、caspase-3、Annexin V/PI染色等

    细胞迁移功能检测：细胞划线实验、Transwell实验、过继转移实验，凝胶迁移实验等

    细胞分泌因子浓度检测：Western Blot、FACS、ELISA等

    细胞分化检测：qPCR、WB检测关键因子、流式检测关键蛋白、镜下细胞表型观察等。

    4)在动物水平上验证XXX作为XXX疾病治疗的可行性

    动物实验

    构建动物模型，不同剂量给药分组(给药可以是该分子的重组蛋白、功能性抑制剂、中和性抗体以及该分子所调节的信号通路的抑制剂等)，不给药组作为阳性对照，健康组作为阴性对照。

    疾病指标检测

    检测疾病相关指标，具体根据研究的疾病不同而定。

    B.研究技术

    这里详细叙述几种该项目中使用到的但是不是常规的实验技术，详细到该实验操作的每一步骤，可以分条陈述.常用实验研究技术如下：

    1) XX疾病动物模型的构建;

    2) 逆转录病毒/慢病毒/腺病毒介导的基因过表达和基因沉默技术;

    3) 通过细胞划线实验、Transwell实验检测细胞迁移能力;

    4) Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡水平;

    5) CFSE染色检测细胞增殖;

    6) 原代细胞分离机培养;

    7) 免疫共沉淀检测蛋白-蛋白之间相互作用;

    8) 染色质免疫共沉淀技术检测DNA-蛋白质相互作用;

    9) RNA结合蛋白免疫沉淀检测RNA与蛋白之间相互作用;

    C.技术路线

    技术路线图(可以根据研究内容放置四个)

    D.可行性分析

    理论上的可行性

    课题设计合理，技术平台成熟

    本课题组长期进行XX疾病或临床问题的研究，对该领域的研究现状和问题非常了解，并在该领域进行了相关性的研究，在此已有的研究基础上我们找到并提出XXXX的假说。XXX在该疾病中表达异常，且我们发现其表达水平与疾病发生具有相关性。我们在前期工作中已成功的通过XXX实验方法，发现XX现象，部分验证了我们所提出的假说。所以该项目在理论上完全可行。

    技术上的可行性

    申请者长期从事XXX方面的研究，对于该领域所必需的实验技术，如细胞凋亡、增殖、分化及迁移等功能的检测、相关动物模型的构建等申请者及申请者团队人员均已熟练掌握。另外，在前期的研究工作中，我们已经成功建立的XXX技术或实验系统，能够保证该项目的顺利展开。同时，XXX实验材料我们已经与XXX单位合作，对方单位已经授权或愿意协助我们完成哪些方面的实验以及给予提供实验材料等。该项目在技术上是可行的。

    条件上的可行性

    本课题组具备细胞生物学，分子生物学必需的仪器设备，如流式细胞仪、荧光定量PCR仪、免疫组化相关设备、荧光显微镜等。申请者所在单位还拥有SPF级动物房，科室建有疾病样本库，保留了大量的XX疾病相关的临床标本，包括组织蜡块、新鲜组织(液氮保存)、基因组DNA、全血和血清，可以为本试验提供标本来源。

    XX医院XX科介绍，包括学科地位，科技奖项，承担课题，教授副教授数量等，表现综合实力强，科研能力和技术力量雄厚。XX医院一向重视科研工作，具有多科协作的优良传统，能够在经费、仪器、设备和人员上保障本课题的顺利完成。

    申请者拥有丰富的科研经验和能力，背景良好。(介绍申请人科研背景)，所以该项目在条件上也是可行的。

4、 本项目的特色及创新之处

　　XXX分子是不是第一次研究，如果是则是一个创新点;

　　XXX分子在XX疾病中的发挥作用，之前有没有报道，如果没有也算是创新点;

　　XXX分子参与的XX信号通路激活是否可以解释XX疾病的发生发展过程，如果是也是一个创新点;

　　XXX是否可以作为药物治疗靶点，也可以作为一个创新点。

5、年度研究计划及预期研究结果

    A.年度计划

    2016.01-2016.06：组织样本的收集及检测：收集XXX例组织样本，使用荧光定量PCR、Western Blot以及免疫组化等方法，检测XXX基因在正常对照以及XX疾病患者中的表达水平变化，该基因与XX疾病的临床相关性。

    2016.07-2016.12：构建XX疾病动物模型，分析XX基因在不同得病程度的实验动物中的表达变化。同时使用相关药物治疗动物，并检测药物治疗后XXX基因与XX疾病的相关性。

    2017.01-2017.06：分离正常动物以及得病动物的XXX组织细胞，使用病毒感染在细胞中过表达或者siRNA基因沉默XXX基因，然后检测XXX基因相关信号通路分子的表达水平变化、信号通路活化程度，以及XXX基因表达改变后对细胞增殖、分化、迁移等功能的影响。

    2017.07-2017.12：进一步在细胞水平验证XXX基因调控XX疾病的分子水平作用机制。

    2018.01-2018.06：诱导XX疾病动物模型，分别使用体外重组表达的XXX蛋白分子、XXX蛋白抑制剂、XXX相关信号通路抑制剂等给予动物不同剂量药物治疗，检测疾病相关指标的变化，评估XXX是否可以作为XX疾病药物治疗的作用靶点。

    2018.07-2018.12：整理实验数据，撰写论文，准备结题，撰写结题报告等。

    (年度计划最好和基金的年限以及研究的内容一致,不要一年一句话式)

    B.预期研究成果

    1)明确XXX是否与XX疾病具有相关性;

    2)明确XXX是否对XX疾病具有保护性/促进性作用;

    3)明确XXX 调控XX疾病的详细分子机制;

    4)进一步通过动物实验，验证XXX是否可以作为XX疾病药物治疗的靶点;

    5)在专业的学术期刊上发表学术SCI论文3-4篇;

    6)培养博士生1名，研究生2-3名;

    7)参加国际学术会议1-2次等等

1、工作基础

    这里主要详细叙述自己的预实验情况，包括实验结果和图片

2、工作条件

    实验室情况，硬件及软件等。

来源：溢文生物