【文献解读】隔药灸通过上调克罗恩病小鼠模型中A20的表达减轻异常肠上皮细胞凋亡
发布于 2021-09-15 13:28
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Zhou J, Wu L Y, Chen L, et al. Herbs-partitioned moxibustion alleviates aberrant intestinal epithelial cell apoptosis by upregulating A20 expression in a mouse model of Crohn's disease[J]. World J Gastroenterol, 2019,25(17):2071-2085.
摘要
隔药灸 (HPM) 已被证明是克罗恩病的有效治疗方法。然而，迄今为止，HPM 减少克罗恩病肠上皮细胞凋亡的机制尚未完全阐明。阐明 HPM 是否通过上调 A20 来影响克罗恩病小鼠模型中的肠上皮细胞凋亡来发挥其作用。我们的研究结果表明，HPM 治疗克罗恩病的作用可能是通过上调 A20 表达水平，导致 TNFR1、TRADD 和 RIP1 的下调，以减轻克罗恩病肠上皮屏障中增加的细胞凋亡。
结果
1.各组肠道形态观察
在 A20 IEC-KO（敲除） NC 小鼠中，观察到完整的粘膜上皮细胞和正常的粘膜下层和肌层结构形态（图E）。在A20 IEC-KO MC小鼠中，除了粘膜表面的侵蚀和坏死外，在粘膜中观察到部分上皮细胞丢失、粘膜杯状细胞耗竭、炎性细胞浸润、腺体损伤和纤维组织增殖。在黏膜和黏膜下层均观察到充血和水肿（F）。在 A20 IEC-KO MESA 小鼠中，在粘膜中观察到稀疏的杯状细胞、小的愈合性溃疡伴腺体破坏和大量炎性细胞浸润。黏膜、黏膜下或肌层未见明显异常结构改变（G）。在 A20 IEC-KO HPM 小鼠中，黏膜组织中观察到稀疏的杯状细胞、炎性细胞浸润和纤维组织增殖。黏膜、黏膜下或肌层未见明显异常结构改变（H）。
2.各组上皮通透性的变化
在 A20 IEC-KO组小鼠中，与 NC 小鼠相比，MC、MESA 和 HPM 组的血清内毒素水平上调（P MC < 0.01，P MESA < 0.01，P HPM < 0.01）。与 MC 小鼠相比，它们在 MESA 和 HPM 小鼠中下调（P MESA < 0.01，P HPM < 0.01）。与 MESA 组相比，HPM 小鼠的血清内毒素水平显著降低（P < 0.01）。与WT NC小鼠相比，NC A20 IEC-KO小鼠血清内毒素水平无显著差异（P > 0.05）。与WT MC小鼠相比，MC A20 IEC-KO小鼠的内毒素水平上调（P <0.05）。与WT HPM小鼠相比，HPM A20 IEC-KO小鼠的血清内毒素水平上调（P < 0.01）。
3. 各组凋亡小肠上皮细胞百分比观察
在 A20 IEC-KO组中，与 NC 小鼠相比，MC、MESA 和 HPM 组的细胞凋亡百分比显著增加（P MC < 0.01，P MESA < 0.01，P HPM < 0.01）。与 MC 组相比，MESA 和 HPM 组的细胞凋亡百分比显著降低（P MESA < 0.01，P HPM < 0.01）。HPM 组和 MESA 组之间无差异（P > 0.05）（图E）。与相应的WT小鼠各组相比，A20 IEC-KO小鼠的NC、MC、MESA和HPM组的凋亡百分比显著增加（P NC < 0.01，P MC < 0.01，P MESA < 0.01，P HPM < 0.01)（图A）。
4.TNF-α/TNFR1-TRADD-FADD 凋亡通路成员在各组肠上皮中的表达
各组A20表达：A20 IEC-KO组间 A20 表达无显著差异（P NC > 0.05，P MC > 0.05，P MESA > 0.05，P HPM > 0.05）（图（图4A）。4A）。与相应的WT小鼠各组相比，所有A20 IEC-KO组的A20表达水平均显著降低（P NC < 0.01，P MC < 0.01，P MESA < 0.01，P HPM < 0.01）（图A）。
各组 TNF-α 表达：在 A20 IEC-KO组中，与 NC 小鼠相比，MC、MESA 和 HPM 组的 TNF-α 水平显著增加（P MC < 0.01，P MESA < 0.01，P HMP < 0.01）。与 MC 小鼠相比，MESA 和 HPM 小鼠的 TNF-α 水平显著降低（P MESA < 0.01，P HMP < 0.01）。与 MESA 组相比，HPM 小鼠的 TNF-α 水平降低（P < 0.05）（图（图4B）。4B）。A20 IEC-KO NC组和HPM组与相应的WT小鼠各组比较，TNF-α水平无差异（P > 0.05）；TNF-α 在 MC 小鼠中表达增加（P < 0.05），在 MESA 小鼠中显著增加（P < 0.01）（图B）。
各组TNFR1表达：在 A20 IEC-KO组中，与 NC 小鼠相比，MC 和 HPM 小鼠的 TNFR1 表达显著增加（P MC < 0.01，P HPM < 0.01）。它也在 MESA 小鼠中增加（P MESA < 0.05）。与MC小鼠相比，MESA和HPM组小鼠TNFR1表达显著降低（P MESA < 0.01，P HMP < 0.01）。与MESA组相比，HPM组小鼠TNFR1表达无差异（P > 0.05）（图（图4C）。4C）。与相应的WT MC和WT HPM组相比，A20 IEC-KO小鼠的TNFR1表达增加（P MC < 0.05，P HPM < 0.05）。在相应的 WT 和 A20 IEC-KO NC 和 MESA 组中，TNFR1 表达没有差异（P NC > 0.05，P MESA > 0.05）（图C）。
各组TRADD表达：在 A20 IEC-KO组中，与 NC 小鼠相比，MC、MESA 和 HPM 小鼠的 TRADD 水平显著增加（P MC < 0.01，P MESA < 0.01，P HPM < 0.01）。注意到 MC、MESA 和 HPM 组之间的 TRADD 水平没有差异（P > 0.05）（图（图4D）。4D）。与WT NC小鼠相比，同一组A20 IEC-KO小鼠的TRADD表达无差异（P > 0.05）。与相应的WT组相比，发现TRADD表达在MESA和HPM组小鼠中显著增加（P MESA < 0.01，P HPM < 0.01）并且在MC组A20 IEC-KO小鼠中增加（P < 0.05）（图D）。
RIP1 跨组表达：在A20 IEC-KO组小鼠中，与NC组相比，MC、MESA和HPM小鼠的RIP1水平显著升高（P MC < 0.01，P MESA < 0.01，P HPM < 0.01）。MC、MESA 和 HPM 组之间的 RIP1 水平没有差异（P > 0.05）（图（图4E）。4E）。与WT NC小鼠相比，A20 IEC-KO NC小鼠的RIP1表达没有差异（P > 0.05）。与 WT HPM 小鼠相比，A20 IEC-KO HPM 小鼠中 RIP1 的表达增加（P < 0.01）。与相应的 WT MC 和 MESA 小鼠相比，A20 IEC-KO小鼠的RIP1 表达增加（P MC < 0.05，P MESA < 0.05）（图（图4E4E）。
组间FADD表达：在 A20 IEC-KO组中，与 NC 小鼠相比，MC、MESA 和 HPM 小鼠的 FADD 水平显著增加（P MC < 0.01，P MESA < 0.01，P HPM < 0.01）。在 MC、MESA 和 HPM 小鼠中，FADD 的表达没有差异（P > 0.05）（图（图4F）。4楼）。与 WT NC 和 MC 小鼠相比，A20 IEC-KO NC 和 MC 小鼠之间没有发现 FADD 水平差异（P NC > 0.05，P MC > 0.05）。与 WT HPM 小鼠相比，A20 IEC-KO HPM 小鼠的FADD 水平显著增加（P < 0.01）。与 WT MESA 小鼠相比，A20 IEC-KO MESA 小鼠的FADD 水平增加（P < 0.05）（图F）。
5.A20/TRADD和A20/RIP1在各组肠上皮组织中的共表达
结论
HPM 可以上调 A20 水平，导致 TNFR1、TRADD 和 RIP1 的表达降低，从而减轻克罗恩病肠上皮屏障中的异常细胞凋亡。
编辑：张靖宇 李柠岑
审核：陈波
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