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发布于 2021-10-10 22:36
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目的 探讨水通道蛋白3(AQP3)介导肿瘤微环境中过氧化氢(H2O2)转运对宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移的作用。方法 应用宫颈癌HeLa细胞,构建AQP3 shRNA慢病毒稳定转染宫颈癌细胞系,通过克隆形成、CCK-8、细胞平板克隆形成、Western blotting等比较H2O2处理前后细胞表型的差异。结果 成功构建AQP3-464- shRNA慢病毒稳定转染HeLa细胞系,AQP3 shRNA抑制肿瘤微环境中H2O2转运,抑制宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移,AQP3 shRNA抑制肿瘤微环境中H2O2转运调控下游信号蛋白激酶B(PKB)。结论 AQP3介导宫颈癌HeLa细胞中H2O2跨膜转运,激发细胞内依赖第二信使H2O2的下游信号PKB,促进HeLa细胞的增殖、迁移。
目的 探讨核因子E2相关因子2(Nrf2)在晶状体上皮细胞抗过氧化氢(H2O2)氧化损伤和凋亡中的作用。方法 通过MTT测定不同浓度H2O2对人晶状体上皮细胞(HLECs)活力的影响;流式细胞术检测正常对照组(不加H2O2),不同浓度H2O2处理组(100、200及300?μmol/L)和Nrf2抑制组(GSK-3β+H2O2 300?μmol/L)活性氧(ROS)及超氧化物酶歧化酶(SOD)的含量;Western blotting检测凋亡相关蛋白剪切型Caspase-3(Cleaved-Caspase-3)、Bax、Bcl-2、Nrf2总蛋白、Nrf2核蛋白及Nrf2浆蛋白的表达;免疫荧光法检查Nrf2在晶状体上皮细胞的表达和定位。结果 当H2O2浓度为400?μmol/L时,晶状体上皮细胞不可逆死亡。细胞经H2O2处理48?h后,各组ROS的表达量比较,差异有统计学意义(P?<0.05),与正常对照组比较,各处理组ROS含量升高(P?0.05)。处理48 h后,各组SOD的含量比较,差异有统计学意义(P?<0.05);与正常对照组比较,各处理组的SOD含量降低(P?<0.05),与H2O2高浓度组比较,Nrf2抑制组SOD含量下降(P?<0.05)。处理48?h后,各组Cleaved-Caspase-3、Bax、Bcl-2表达的比较,差异有统计学意义(P?<0.05),与正常对照组比较,H2O2各个浓度组Caspase-3、Bax降低(P?< 0.05),Bcl-2升高(P?<0.05),与H2O2高浓度组比较,Nrf2抑制组的Cleaved-Caspase-3、Bax升高(P?<0.05),而Bcl-2降低(P?<0.05);H2O2各浓度组中Nrf2相对表达相应增多且有核内转移的趋势,Nrf2抑制组无Nrf2表达。结论 Nrf2在人晶状体上皮细胞中的表达及核易位能增加抗氧化酶和抗凋亡蛋白的含量,降低促凋亡蛋白含量,从而起到自身抗氧化损伤和抗凋亡的作用。
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